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在運(yùn)行qPCR實(shí)驗(yàn)或分析數(shù)據(jù)時(shí)，有時(shí)候會(huì)遇到軟件報(bào)錯(cuò)，小編在這里列舉了Applied BiosystemsTM 品牌儀器軟件的常見(jiàn)報(bào)錯(cuò)，分析了可能的原因和解決辦法，如果您正在使用我們的儀器，希望本文能給您提供一些解決軟件報(bào)錯(cuò)問(wèn)題的思路。
問(wèn)題分析： 可能是單次數(shù)據(jù)異常，導(dǎo)致校正文件丟失。在軟件上點(diǎn)擊Analysis > override calibration > Use another calibration file 下選擇同儀器相同類(lèi)型實(shí)驗(yàn)文件做校正 ，重新分析后可以恢復(fù)正常數(shù)據(jù)。出現(xiàn)該報(bào)錯(cuò)的原因可能是雙擊了start run, 或者分析/保存數(shù)據(jù)過(guò)程被中斷，例如分析/保存過(guò)程中關(guān)閉軟件或拔出U盤(pán)。 2. 打開(kāi)數(shù)據(jù)分析軟件報(bào)錯(cuò)：Analysis cannot proceed: not enough sample definded（如圖stepone plus軟件，此報(bào)錯(cuò)僅限stepone，stepone plus，7300 plus，7500 v2.0以上版本軟件）。 問(wèn)題分析： plate setup步驟未給樣品孔設(shè)置sample信息，設(shè)置好sample信息后重新分析，數(shù)據(jù)可以恢復(fù)正常。 3. 打開(kāi)數(shù)據(jù)分析軟件報(bào)錯(cuò)：Analysis cannot proceed: not enough targets definded（如圖stepone plus軟件，此報(bào)錯(cuò)僅限stepone，stepone plus，7300 plus，7500 v2.0以上版本軟件）。 問(wèn)題分析： plate setup步驟未給樣品孔設(shè)置target信息，設(shè)置好target信息后重新分析，數(shù)據(jù)可以恢復(fù)正常。 4. 打開(kāi)數(shù)據(jù)分析軟件報(bào)錯(cuò)：Analysis failed due to: GExSession doesn't exist in context。點(diǎn)擊OK 接受后，擴(kuò)增曲線是空白（如圖stepone plus軟件）。 問(wèn)題分析： 擴(kuò)增循環(huán)階段未采集信號(hào)，需要打開(kāi)信號(hào)收集標(biāo)識(shí)。 5. 在多重反應(yīng)程序設(shè)置中，給樣品孔添加ROX作為reportor 的探針時(shí)，報(bào)錯(cuò)：Dye "ROX" already used in passive reference（如圖Q5軟件）。 問(wèn)題分析： 儀器默認(rèn)passive reference選擇ROX作為參比熒光，如果實(shí)驗(yàn)中ROX是作為探針的報(bào)告基團(tuán)，則需要將passive reference改成None，之后就可以在target設(shè)置中選擇ROX作為探針了。 6. 打開(kāi)數(shù)據(jù)分析軟件報(bào)錯(cuò)：The selected file cannot be opened, cannot open the file because file contents are not recognized（如圖Q5軟件）。 問(wèn)題分析： 可能的原因包括： 1. 通過(guò)導(dǎo)入文件(import plate setup)在實(shí)驗(yàn)中添加了重復(fù)的樣本，使用了相同的sample name，建議編輯樣品名稱時(shí)不要使用相同的sample name 命名樣品。 2. 實(shí)驗(yàn)名稱包含不合要求的字符，例如空格，括號(hào)等，建議實(shí)驗(yàn)名稱不要使用不符要求的字符。 3. 文件受損，數(shù)據(jù)不完整，建議儀器運(yùn)行過(guò)程中不要操作軟件。 4. 拷貝數(shù)據(jù)的U盤(pán)有故障，導(dǎo)致拷貝數(shù)據(jù)不完整，建議更換U盤(pán)重新拷貝數(shù)據(jù)。 1. 運(yùn)行程序時(shí)報(bào)錯(cuò)：1404 Hold duration too short for read。 問(wèn)題分析： 數(shù)據(jù)采集時(shí)間太短，PCR循環(huán)階段data collection step 時(shí)間設(shè)置不小于31秒，melt curve 階段data collection step請(qǐng)勿修改。 2. 運(yùn)行程序時(shí)報(bào)錯(cuò)：Java Platform SE Binary has stopped working，實(shí)驗(yàn)中斷。 問(wèn)題分析： 如果通過(guò)直接雙擊已保存的edt模板文件去運(yùn)行實(shí)驗(yàn)程序，可能會(huì)出現(xiàn)報(bào)錯(cuò)。建議先打開(kāi)7500軟件，通過(guò)New Experiment > From Template導(dǎo)入edt文件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 3. 點(diǎn)擊start run時(shí)報(bào)錯(cuò)"The instrument type for the experiment is not compatible with the connected instrument"。 問(wèn)題分析： 實(shí)驗(yàn)中選擇的儀器類(lèi)型與實(shí)際使用的儀器不符，需要到Setup界面重新修改為正確的儀器類(lèi)型。 4. 程序設(shè)置報(bào)黃色提醒 "number of data collection points is not valid" 問(wèn)題分析： 運(yùn)行程序設(shè)置了多個(gè)信號(hào)采集點(diǎn)，定量實(shí)驗(yàn)中只能設(shè)置一個(gè)信號(hào)采集點(diǎn)，可以設(shè)置在cycling stage 。 5. eds文件導(dǎo)入PTS軟件，報(bào)錯(cuò)"cannot import any experiment file(s) because of the following error(s): " 問(wèn)題分析： 使用7500 v2.4版本軟件產(chǎn)生的數(shù)據(jù)與PTS軟件不兼容，可以將eds數(shù)據(jù)先用7500 v2.3的軟件打開(kāi)，分析后保存，然后再導(dǎo)入PTS軟件。 1. 數(shù)據(jù)打開(kāi)后擴(kuò)增曲線是空白，點(diǎn)擊Analyze分析后報(bào)錯(cuò)：The analysis cannot proceed because the experiment is missing required plate setup information. Go to 'Define' and 'Assign' page to creat and assign targets and samples. 點(diǎn)擊OK接受后，擴(kuò)增曲線仍是空白。 問(wèn)題分析： plate setup步驟未給樣品孔設(shè)置target或者sample name信息，設(shè)置好target或者sample name信息后重新分析，數(shù)據(jù)可以恢復(fù)正常。 2. 運(yùn)行PTS實(shí)驗(yàn)報(bào)錯(cuò)：Star run validation: The filter set has not been selected for following target: ROX(x4-m4)。 問(wèn)題分析： 含melt curve的實(shí)驗(yàn)程序中，軟件默認(rèn)melt curve filter只選擇X1M1，PTS實(shí)驗(yàn)需要從軟件進(jìn)入Method-action-optical filter settings, 在melt curve filter選項(xiàng)中將x4m4選中（Q5也可以嘗試x1m3）。 3. 打開(kāi)數(shù)據(jù)分析軟件報(bào)錯(cuò)：Analysis failed due to insufficient data。 問(wèn)題分析： 1.4.3之前版本的軟件有bug, 部分染料法實(shí)驗(yàn)結(jié)果擴(kuò)增曲線是空白，解決方法是在analysis setting 點(diǎn)擊apply，即可恢復(fù)正常顯示。1.4.3之后的軟件版本無(wú)此問(wèn)題。 1. 開(kāi)始運(yùn)行實(shí)驗(yàn)前報(bào)錯(cuò)：You must first download experiment"XXX"before you can start another run on this instrument. 問(wèn)題分析： 上次運(yùn)行實(shí)驗(yàn)沒(méi)有正常傳輸?shù)诫娔X端，需先將上次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)下載到電腦然后才能開(kāi)始運(yùn)行。在軟件上點(diǎn)擊Instrument > Download Experiment from Instrument下載數(shù)據(jù)后，即可重新開(kāi)始運(yùn)行試驗(yàn)。 2. 打開(kāi)數(shù)據(jù)點(diǎn)擊analyze分析軟件報(bào)錯(cuò)：Cannot calculate Pure Dye Matrix。 問(wèn)題分析： 該報(bào)錯(cuò)指示運(yùn)行結(jié)果文件中有原始數(shù)據(jù)丟失，可能是實(shí)驗(yàn)程序沒(méi)有運(yùn)行結(jié)束或在運(yùn)行過(guò)程中被終止所導(dǎo)致。例如客戶將反應(yīng)程序最后一步設(shè)置為infinite holding stage，最后通過(guò)點(diǎn)擊STOP結(jié)束程序容易導(dǎo)致該問(wèn)題。針對(duì)這樣的數(shù)據(jù)，可以聯(lián)系技術(shù)支持尋求幫助。 3. 查看熔解曲線時(shí)出現(xiàn)黃色報(bào)錯(cuò)：No derivative curve for all selected wells due to excessive noise in fluorescence data. 問(wèn)題分析： 熔解曲線程序設(shè)置錯(cuò)誤，如下圖中數(shù)據(jù)誤刪掉了60度的步驟，設(shè)成了95度升溫到95.3度。建議使用SYBR Green染料法做實(shí)驗(yàn)時(shí)，不要修改熔解曲線步驟，使用儀器默認(rèn)程序即可。
